【新品发布】蛋白酶K
浏览次数：2973 日期：2016-05-20 13:21:53
蛋白酶K(Proteinase K)，来源于林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）的蛋白酶K基因，属于丝氨酸蛋白酶类。蛋白酶K具有极高的酶活性和广泛的底物特异性，能优先分解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸C末端邻接的酯键和肽键。在pH4.0到pH12.0均有活性，最适pH在7.5-8.0之间，最适温度在50-55℃之间。在0.2-1%SDS或者10mM尿素存在下，蛋白酶K显示出更高的活力，而在常用浓度的EDTA，Triton X-100，盐酸胍存在下均对蛋白酶K活力影响不大。
随着人类对疾病的认识逐步深入到基因层面，以及基因检测技术的进步，通过对各种DNA和/或RNA样本的病原性突变的检测来实现对疾病的检测和诊断。蛋白酶K主要在DNA、RNA 提取过程中抑制核酸酶和原位杂交中起着重要的作用。另外，蛋白酶K可替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头,实现灭活 RNase A 的目的,也用于处理 RNase-Free的水，为脉冲电场凝胶电泳、RT-PCR等准备无DNase、RNase的样品，提取组织中非蛋白成份时降解含有蛋白质的杂质用途（例如DNA疫苗和肝素的制备）等。
蛋白酶K
科赛格最新推出一批高质量的蛋白酶K，利用本公司生化检测平台对自产蛋白酶K进行表征，显示其纯度高，比酶活高。通过反复质检，均表明本公司自产蛋白酶K无核糖核酸、脱氧核糖核酸，脱氧核糖核酸酶以及核糖核酸酶残留。
校准曲线
配制不同浓度的L-酪氨酸标准溶液，直接用紫外分光光度计于275nm测定其吸光度（A），以吸光度A为纵坐标，酪氨酸的浓度为横坐标，绘制校准曲线。根据校准曲线，计算出比酶活 ≥30U/mg。
图1.以L-酪氨酸为标准品测定校准曲线
纯度
通过SDS-PAGE电泳来检测蛋白浓度，本公司自产的蛋白酶K的纯度在95%以上，大小在28.9kDa。
图2.蛋白酶K的SDS-PAGE电泳图
核酸残留检测
通过琼脂糖凝胶电泳检测蛋白酶K中核酸的残留情况，本公司自产的蛋白酶K无核糖核酸和脱氧核糖核酸残留。
图3.琼脂糖凝胶电泳检测核酸残留
脱氧核糖核酸酶残留检测
通过琼脂糖凝胶电泳检测蛋白酶K中脱氧核糖核酸酶的残留情况，泳道1是λDNA，泳道2是向λDNA中加入了蛋白酶K放置37℃下反应3h后的电泳图，本公司自产的蛋白酶K无脱氧核糖核酸酶残留。
图4.琼脂糖凝胶电泳检测脱氧核糖核酸酶残留
核糖核酸酶残留检测
通过琼脂糖凝胶电泳检测蛋白酶K中核糖核酸酶的残留情况，泳道1是RNA，泳道2是向RNA中加入了蛋白酶K放置37℃下反应3h后的电泳图，本公司自产的蛋白酶K无核糖核酸酶残留。
图5.琼脂糖凝胶电泳检测核糖核酸酶残留
稳定性
将蛋白酶K粉末置于-20℃存储一年，每隔1个月测酶活性，结果如下图6，表明蛋白酶K稳定性好，酶活维持在95%以上。
图6.蛋白酶K在-20℃下的稳定性检测
参考文献
1. Ebeling W, Hennrich N, Klockow M, et al. Proteinase K from Tritirachium album limber[J]. European Journal of Biochemistry, 1974, 47(1): 91-97.
2. Abubakar A, Saito T, Kitazawa H, et al. Structural analysis of new antihypertensive peptides derived from cheese whey protein by proteinase K digestion[J]. Journal of Dairy Science, 1998, 81(12): 3131-3138.
3. Jany K D, Lederer G, Mayer B. Amino acid sequence of proteinase K from the mold Tritirachium album Limber[J]. FEBS letters, 1986, 199(2): 139-144.
