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1992年，Higuchi在一次报告中提出了实时荧光定量PCR技术。通过检测溴化乙锭的含量实时监控整个PCR反应的进程。之后经过不断的研究，通过对PCR反应的数学函数关系、相应的算法以及对标准品的运用，就可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。
 

SYBR Green I 的实际名称是二（4-羟基苯基）-6（4-甲氧基苯基）-三甲基吡啶三乙酸铵，由Invitrogen推出的一种新型定量荧光染料。在定量PCR中，SYBR Green I可与双链DNA（dsDNA）非特异性结合后发出荧光，进而通过检测反应体系中的SYBR Green I 荧光强度，达到检测PCR产物扩增量的目的。游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，一旦与dsDNA结合，其荧光增加1000倍，一个反应发出的全部荧光信号与出现的dsDNA量成比例，且会随扩增产物的增加而增加。所以通过检测PCR反应液中的荧光信号强度，可以对目的基因进行准确定量，同时还可以测定扩增的目的DNA片段的熔解温度。

产品优势

SYBR Green qPCR Mix（CSB-DKT030）是一种采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR 的2×浓度的预混液试剂。其具有以下优势：

 

含有高活性Taq酶，独有含PCR反应增强剂的buffer反应配方。

 

热激活TaqDNA 聚合酶，极大的避免了引物二聚体的形成和非特异性扩增。

 

对同一浓度模板多次检测，显示出稳定的重复性。

 

 

本品使用时市面上不同厂家的各种荧光定量PCR仪。

 

本产品预先混有Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I 荧光染料、稳定剂和镁离子等通用组分，只需加入模板、引物、双蒸馏水便可进行Real Time PCR 反应，操作简单方便。

 

 

 

图1.在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，收集不到荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强，可以收集到荧光。

 

 

 

使用CSB-DKT030，与某品牌产品的实验结果对比

 

 

图2.由荧光定量PCR曲线，可知CSB-DKT030荧光信号更强。

 

 

 

 

图3.从熔解曲线可知CSB-DKT030熔解峰单一、集中，表明其扩增产物特异性更高，实验结果更准确。

 

 

 

 

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