胶乳免疫比浊检测系统的研发策略（以脂联素为例）
浏览次数：225 日期：2023-06-29 15:59:08
胶乳增强免疫比浊法是华美·科赛格的核心验证技术，它的基本检测原理是：抗原抗体在缓冲中快速形成网状的抗原-抗体分子复合物，使反应液出现浊度，透光率下降。在一定的比例范围内，反应液的浊度和抗原抗体的量呈线性相关关系。
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实际使用中，一般保持反应液中抗体过量，形成的复合物会随着样本中抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物质的含量。
其基于抗原抗体特异性反应以及胶乳增强放大的原理，具有灵敏度高，特异性好，抗干扰能力强等优点，该分析自建立以来，在原料的评价和检测方面得到了飞速发展，我们不断的对其探索、改进，更加致力于将其应用到不同的检测项目中，完善免疫比浊技术；但其研发周期长，步骤复杂，需要关注的因素较多。
今天小编就为大家梳理下胶乳免疫比浊试剂的研发流程及难点，希望对各位老师的研发工作有所帮助。
① 抗原、抗体、胶乳微球的选择
胶乳比浊试剂研发最重要的步骤就是针对开发项目的检测范围，选择合适的抗原抗体和胶乳微球。抗原抗体的选择主要是对比其等电点，特异性和亲和力。等电点主要决定交联阶段的PH值；亲和力越高的原料，灵敏度越高，但过高可能会影响线性；特异性越好的原料，临床相关性越好。选择胶乳微球，主要是比对粒径：粒径越大，灵敏度越高；粒径越小，线性越长。一般情况下，灵敏度大于100 ng/ml的，可以试用200 nm以下的微球，灵敏度小于100 ng/ml的可以先试用200 nm以上的微球。当一个微球没办法同时满足灵敏度和线性要求时，可以大球和小球混用，多为小球中混入大球。整个测定体系中，微球的浓度在0.01%左右，这与试剂本身规定的线性有关系。
② 反应流程
活化剂EDC的用量是根据微球表面羧基浓度来计算的，且与微球的凝集相关，一般活化时间以10-20 min为宜，长时间的活化反而会降低偶联效率。但是，实际操作中还是要结合功能性试验检测结果来进一步优化。
胶乳比浊试剂不同项目的反应流程大致是一样的，一般分为1步法和2步法。2步法会比1步法多出1-2步离心、重悬的步骤，好处是可以去除多余的EDC，NHS等干扰，坏处是生产比较麻烦。微球粒径越小越难离心。加入抗体/抗原后，快速搅拌混合，利于反应均衡，还需要根于抗体/抗原的等电点调整偶联液的PH值。
③ 调整反应条件
影响试剂性能的除了前面提到的抗原、抗体和胶乳微球外，还有各步反应条件，比如PH值、温度、反应时间、溶液的离子强度、抗体用量、封闭剂、保护剂的选择等等。每个条件都需要优化到较好的状态且达到平衡，才能长时间的保持试剂性能的稳定。
④ 验证试剂的性能从而判定原料是否合格
原料的鉴定分为两个大方向，一方面从原料自身表位、亚型、亲和力、交叉反应、稳定性、浓度，纯度，效价，等电点等方面进行控制；另一方面从应用层面分析，试剂的线性范围，HOOK值，灵敏度，准确度，精密度，空白吸光度，稳定性，抗干扰等方面。
例如：脂联素（Adiponectin/ADPN）-----------预测II型糖尿病的发生及风险评估指标
ADPN的临床意义
脂联素（Adiponectin/ADPN）是一种主要由脂肪细胞分泌的蛋白类激素，大量存在于血液循环中，约占人血浆总蛋白的0.01％(5-30μg/ml)在调节胰岛素敏感性，及葡萄糖代谢的过程中扮演重要角色。人类脂联素单体由244个氨基酸组成。
脂联素是一种可对2型糖尿病进行早期风险预测的新指标。不同于血糖和糖化血红蛋白这两个糖尿病诊断指标，脂联素是糖尿病的风险预测指标。通过脂联素可筛查出血糖尚且正常，但机体生理代谢已经出现异常的糖尿病高风险人群，脂联素可动态反映机体的胰岛素抵抗水平，与个体代谢健康息息相关。
产品信息
宿主动物：Balb/c小鼠
融合细胞系：Sp2/0
抗原：脂联素
纯度：经SDS-PAGE检测，纯度>90%
提纯方法：蛋白G亲和层析
物理状态：溶于PBS，0.22 μm过滤，含微量叠氮钠
货号：CSB-DA120AmN①
比对试剂：日本知名厂家
相关性：＞0.98
主要参数及性能
主要参数及定标曲线 – 日立7180机型
精密度 – 测试低值和高值质控，批内精密度＜5%
相关性 – 与日本知名厂家相比，相关系数r＞0.97
原料加速稳定性
订购信息
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