简析抗体产品的质量标准
浏览次数：70 日期：2023-08-18 17:06:24
抗体产品是诊断试剂原料的重要组成部分，产品质量标准的建立和执行，是确保下游生产合格的保障。通常抗体的主要性能指标包括外观、纯度与分子量、浓度、特异性、亲合力、活性或效价、功能性实验等方面，这些参数的测定对抗体的质控与应用均有十分重要的意义。
①外观
通常情况下，生产制造阶段的抗体产品，采用肉眼观察，结果应为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀及颗粒；相关过程参考《中国药典》0904可见异物检查法，如存在可见异物或产品性状与要求不一致的按照不合格处理。
②纯度与分子量
目前诊断用抗体主要来源于杂交瘤上清液及腹水，通过新的技术方案，也有部分采用重组表达的生产方式，为了保证试剂的性能，必须严格控制抗体产品的纯度与分子量。
传统方法是经SDS-PAGE电泳后，利用电泳扫描仪进行分析，根据所检测生物原料的分子量，选择适宜聚丙烯酰胺凝胶浓度进行电泳，一般每个电泳道加样量为5ug，电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量，纯度应达到相应的质量标准，分子量大小应在正确的条带位置。通常抗体在SDS-PAGE电泳后会呈现出重链和轻链的两个条带，IgG类型的重链分子量约为50-70kDa，轻链分子量约为25kDa，下图为我司目前在售产品纯度及分子量检测的结果示例。
③浓度
蛋白浓度的测定一直是公认的难题，特别是针对不同的蛋白氨基酸序列，以及不同的纯度和基质条件下，均对蛋白浓度测定有较大的影响。在确保抗体产品外观及纯度符合要求后，特别是纯度>95%的情况下，可以直接采用蛋白定量方法，相关过程参考《中国药典》0731蛋白质含量测定法中的第六法：紫外-可见分光光度法。
目前业内基本采用紫外-可见分光光度法（280nm光吸收法）对抗体样品的蛋白含量进行检测，用样品稀释液将供试品稀释至约0.4mg/mL，检测280nm处吸收度A，根据公式计算蛋白质浓度C（mg/mL），C=A/ ε×DF,式中，ε为消光系数，DF为稀释倍数。
④特异性
抗体特异性是确保最终试剂产品特异性的关键，这里指的是一种抗体识别具有不同结构抗原的能力，主要是抗体结合部位与抗原表位间的相互作用。主要有以下两种方法：1）基于直接法或间接法，采用特定的已知抗体对目标抗原没有交叉反应性，或待测抗体对其靶抗原相近的抗原没有反应；2）基于竞争法，抗体对原始特定抗原的结合反应中，其他相近抗原分子对这种结合反应无干扰作用。抗体的特异性鉴定的传统方案是特异性抗原及相似的抗原与待鉴定抗体的双向免疫扩散试验，如果不存在交叉反应，说明抗体的特异性很好。目前抗体特异性的测定的分析技术主要采用ELISA法等。
⑤亲合力
抗体的亲合力是抗体与抗原结合紧密程度的衡量指标，即抗体单个Fab对相应抗原的单个抗原表位的特异结合能力。亲合力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原表位之间的立体构象的合适程度决定。有助于维持抗原-抗体复合物稳定的分子间作用，有氢键、疏水键、电荷基团间的库仑力及范德华力。抗体的亲合力越高，其对抗原的结合力越强。常以亲合常数K表示亲合力，单位为L/mol，通常K的数值范围为108~1010L/mol，有的可高达1014L/mol。抗体亲合力的测定对抗体的筛选、确定抗体的用途和验证抗体的均一性等方面有重要意义。在免疫测定及建立各种检测方法时，应选用亲合力高的抗体，既能够提高敏感性和特异性，又可以节约试验试剂。亲合力测定的常用方法有平衡透析法（ED）、ELISA法、表面等离子体共振技术（SPR）、石英晶体微天平（QCM）测定法等。
⑥效价
无论是用于研究、诊断，还是用于治疗，都要求制备的抗体具有高效价，但不同抗原制备的抗体，其可能达到的效价高低不等。鉴定抗体效价的方法很多，常用的方法主要包括凝集反应、双向免疫扩散试验、ELISA、间接荧光免疫试验等。
目前诊断用途的抗体产品，ELISA测定效价是最主流的方法，其过程如下：先将己知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的微孔内，加入待测抗体，保温孵育后洗涤除去未结合的杂蛋自，加酶标抗抗体，保温孵育后洗涤，加入底物孵育一定时间后，终止酶促反应，用目测或酶标仪测定抗体效价。整个过程抗体样品采用倍比稀释，通常要求效价比对实验中，在多个抗原浓度水平上，与内部质量控制的参考样品保持一致。
⑦功能性实验
功能性实验是指抗体原料用于试剂盒的实际生产中的情况，一般考察使用该原料的试剂盒的灵敏度、特异性和稳定性等分析性能指标是否达到要求，并比较其与合格批次原料的是否存在显著性差异。功能性实验通常可以理解为原料的小试测评，即将抗体采用经验证合格的试剂生产工艺过程，与参比批次和历史数据做比较分析，在小试中达到预期的比对结果，以便保证后续正式生产使用时满足要求。对此不同的项目和不同的抗体产品，会存在一些共性和差异，主要表现在以下几个方面：
（1）小试工艺的完善性，主要是确保工艺的复现情况，同时确保小量分析体系的稳定性，由此主要分析功能性实验中的结果可靠与差异来源；
（2）不同工艺的通用型和典型性，有的抗体产品对工艺的依赖性较高，面对一些较为特殊的工艺过程，会表现出特定差异。对此，通用型较强的抗体对工艺的要求范围比较宽泛，功能性实验的方案需要建立在有效反应原料本身差异的前提下，需要具有一定的典型代表性。例如：不同pH条件的工艺设定和制剂要求，会导致在某些特定的条件下，抗体产品的差异更显著；
（3）控制和测评样本的代表性和稳定性，在功能性实验中，通常会采用参考物质及样本盘来开展一些性能分析，作为检测系统的评价指标，参考物质及样本盘本身是否适合开展测评，其研究往往有待完善。例如：采用第三方的质控品来作为内部评价和控制的重要样品，需要优先研究其是否可以匹配试剂产品，实现功能性实验测评的要求，其基于数据统计确定的靶值是否适用于自建系统，否则在没有充分验证的情况下可能会导致结果误判。
目前永利娱场城官网首页入口工业原料事业部的抗体产品，其测试评价及质量控制均包括上述各项指标和要求，严格执行7项分析过程和6项质量检验，使品质始终贯彻在每个产品的生命周期中。
